Εργαστηριακές εργασίες. Προσδιορισμός της δραστηριότητας της καταλάσης
(Σύμφωνα με τον Α.Ν. Bahu και A.I. oparina)
Όλοι οι διαφορετικοί μετασχηματισμοί που αποτελούν τη βάση της ζωής του σώματος συμβαίνουν με τη συμμετοχή βιολογικών καταλυτών - ενζύμων που είναι συγκεκριμένες πρωτεΐνες.
Χάρη στα ένζυμα, ένα από τα υπέροχα χαρακτηριστικά των ζωντανών κυττάρων εκδηλώνεται - η ικανότητα να εφαρμόζει τις πιο σύνθετες αντιδράσεις σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα και σε μια σχετικά χαμηλή θερμοκρασία του σώματος. Η βιολογική σημασία αυτού του φαινομένου είναι πολύ μεγάλο.
Για να μελετήσετε τη δράση των ενζύμων, είναι απαραίτητο να τα διαθέσετε από ζωντανούς ιστούς. Συνήθως, για το σκοπό αυτό, επιλέγεται μια εύκολα προσβάσιμη πηγή πλούσια σε αυτό το ένζυμο. Για να μεταφράσει το ένζυμο στο διάλυμα, είναι απαραίτητο να καταστραφούν τα κυτταρικά κελύφη, τα οποία επιτυγχάνονται χρησιμοποιώντας ένα ομογενοποιητή, τρίβοντας σε κονίαμα με γουδοχέρι, κατάψυξη και απόψυξη, αυτόλύση, κλπ. Συνήθως, η καταστροφή κυτταρικών κελυφών παράγεται Σε χαμηλές θερμοκρασίες, λόγω των οποίων όλες οι ενζυματικές διεργασίες αιωρούνται σε ιστούς.
Η ομάδα των ενδομυρών οξειδοαναγωγής περιλαμβάνει ένα ένζυμο που περιέχει το κέρατο Καταλάβωη οποία καταλύει την αντίδραση της αποσύνθεσης του υπεροξειδίου του υδρογόνου με την απελευθέρωση μοριακού οξυγόνου:
2n 2 o 2 - > 2 ώρες 2 o + o 2
Η καταλάση βρίσκεται στα περισσότερα υφάσματα ενός ζωντανού οργανισμού.
Αρχή της μεθόδου.
Το υπεροξείδιο του υδρογόνου αποσυντίθεται από την καταλάση. Η περίσσεια υπεροξειδίου του υδρογόνου τιτλοποιείται με υπερμαγγανικό κάλιο σε ένα όξινο περιβάλλον. Η αντίδραση βρίσκεται υπό την εξίσωση:
2 kmno 4 + 5 ώρες 2 o 2 + 3 ώρες 2 SO 4 - > 2 MNSO 4 + Κ2 Έτσι 4 + 8Η2Ο + 5 o 2
Στο πείραμα, ο αριθμός του υπόλοιπου μη καταστρεπτικού υπεροξειδίου του υδρογόνου προσδιορίζεται, στον έλεγχο - ο συνολικός αριθμός υπεροξειδίου του υδρογόνου (η καταλάση στο δείγμα ελέγχου απενεργοποιείται με βρασμό).
Αντιμετώπιση των αποτελεσμάτων της εμπειρίας από τα αποτελέσματα του ελέγχου, μάθετε τον αριθμό του υπεροξειδίου του υδρογόνου που καταστρέφεται σε μια ορισμένη χρονική περίοδο, γεγονός που καθιστά δυνατή την κρίση της δραστηριότητας της καταλάσης.
Εξοπλισμός: 1. Ταχέκια απευθείας κατά 50 και 100 ml (1 τεμ.)
2. Κύλινδρος σε 10 ml
3. Κονιάστε με γουδοχέρι
4. Κωνικές φιάλες ανά 200-250 ml (2 τεμ.)
5. Τεχνικές κλίμακες με παραλλαγές
6. Pipette σε 10 ml "εξάτμιση ενζύμων"
7. Pipette "H 2 SO 4"
8. Βραστό λουτρό νερού
9. Σπάτουλα
10. Βιομηχανία φιάλης ανά 100 ml
11. Voronek
12. Χαρτί φίλτρου
Υλικά: 1. Νωπά φυτικά υλικά (καρότα ή πατάτες)
2. 0,1 H2O 2 διάλυμα
3. Διάλυμα 0,1Ν kmno4
4. 10% διάλυμα H 2 So 4
5. Saco 3 (Cryst.)
6. άμμος χαλαζία
Πρόοδος:
2 g ακατέργαστων πατατών (ή καρότα) κονιοποιούνται με άμμο χαλαζία σε κονίαμα, προσθέτοντας σταδιακά 2-3 ml νερού. Για να μειωθεί η αντίδραση οξέος, προσθέστε ανθρακικό ασβέστιο Spike για να σταματήσετε την απέκκριση φυσαλίδων διοξειδίου του άνθρακα. Η μάζα μεταφέρεται ποσοτικά στη φιάλη μέτρησης και φέρει σε 100 ml με νερό. Το μίγμα αφήνεται να παραμείνει για 30-60 λεπτά, μετά το οποίο διηθείται.
Σε μια κωνική φιάλη σε 200 ml, λαμβάνονται 25 ml διαλύματος υπεροξειδίου του υδρογόνου 0,1Η από μια ξύλινη τσιμπή και προστίθεται μια πιπέτα 20 ml ενζυμικής εξάτμισης. Μετά από 30 λεπτά, η δράση του ενζύμου διακόπτεται προσθέτοντας 5 ml διαλύματος θειικού οξέος 10% και τιτλοδοτή ένα μείγμα διαλύματος υπερμαγγανικού καλίου 0.1Η (πριν από τον σχηματισμό ανθεκτικό για περίπου 1 λεπτό ροζ χρώση). Ο αριθμός των χιλιοστόλιων του διαλύματος υπερμαγγανικού καλίου, ο οποίος πήγε στην τιτλοδότηση του εναπομείναντος υπεροξειδίου του υδρογόνου.
Ταυτόχρονα, ελέγχονται με απενεργοποιημένη θέρμανση σε λουτρό βρασμού νερού για 5 λεπτά με ένα διάλυμα ενζύμου (20 ml) σε αυτό το διάλυμα μετά από ψύξη, προστίθενται 25 ml διαλύματος υπεροξειδίου του υδρογόνου 0,1Η 0,1Η. Το μίγμα αφήνεται να παραμείνει για 30 λεπτά, μετά την οποία προστίθενται 5 ml ενός διαλύματος θειικού οξέος 10% και χρωματίζονται με διάλυμα υπερμαγγανικού καλίου 0,1 ώρες. Ο αριθμός των χιλιοστόλιων υπερμαγγανικού καλίου, ο οποίος πήγε στον τίτλο τη συνολική ποσότητα υπεροξειδίου του υδρογόνου.
Όσον αφορά τη διαφορά μεταξύ της πειραματικής και τιτλοδότησης ελέγχου, η ποσότητα του υπερμαγγανικού είναι ισοδύναμη με την ποσότητα αποσυντίθεσης υπεροξειδίου του υδρογόνου. Σύμφωνα με την εξίσωση αντίδρασης μεταξύ KMNO4 και Η2Ο2, 1 ml 0,1Η μόνιμου διαλύματος υπερμαγγανικού καλίου αντιστοιχεί σε 1,7 mg υπεροξειδίου του υδρογόνου.
Παράδειγμα υπολογισμού.
Από τα 1,25 g καρότων παρασκευάζονται μια εξάτμιση καταλάσης με όγκο 100 ml. Οι δοκιμές 15,5 ml δαπάνησαν στην τιτλοδότηση του πειραματικού δείγματος, του ελέγχου-30,2 ml 0,1Η μόνιμου διαλύματος υπερμαγγανικού καλίου. Η ποσότητα του αποσυντίθετου υπεροξειδίου του υδρογόνου στο δείγμα ισοδυναμεί με 30,2-15,5 \u003d 14,7 ml μόνιμου διαλύματος του υπερμαγγανικού καλίου και, κατά συνέπεια, 14,7 * 1,7 \u003d 24,99 mg.
Σε 1 g ακατέργαστων καρότων, περιέχει την ποσότητα της καταλάσης, ικανή να αποσυντίθεται σε 30 λεπτά (24,99 * 100) / (20 * 1,25) \u003d 99,96 mg υπεροξειδίου του υδρογόνου και για 1 λεπτό - 99,96 / 30 \u003d 3,33 mg. Οπως και
1 μmol υπεροξείδιο του υδρογόνου είναι 0,034 mg, κατόπιν 33,3 / 0,034 \u003d 100 Ε καταλάσες υπάρχουν σε 1 g καρότων.
Εργαστηριακός αριθμός εργασίας 4.
Παρασκευή του μυστικού από κύτταρα ζυμομυκήτων. Την ιδιαιτερότητα της δράσης των ενζύμων.
Όλοι οι διαφορετικοί χημικοί μετασχηματισμοί, οι οποίοι αποτελούν τη βάση της ζωής του σώματος, προχωρούν με τη συμμετοχή βιολογικών καταλυτών - ενζύμων, τα οποία με τα ΝΔ C και F και H C και M και B E L K και M και.
Χάρη στα ένζυμα, ένα από τα αξιοσημείωτα χαρακτηριστικά των ζωντανών κυττάρων εκδηλώνεται - η δυνατότητα εφαρμογής των πιο περίπλοκων αντιδράσεων σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα και σχετικά σε χαμηλή θερμοκρασία του σώματος.
Η μελέτη των ιδιοτήτων των ενζύμων, οι συνθήκες της δράσης τους, ο προσδιορισμός του περιεχομένου των ενζύμων σε διάφορα όργανα και ιστούς έχει μεγάλη σημασία για τη σωστή κατανόηση των πιο περίπλοκων διαδικασιών της ζωής του σώματος.
Μία από τις σημαντικότερες ιδιότητες των ενζύμων είναι η ιδιαιτερότητα της δράσης τους σε σχέση με ένα συγκεκριμένο υπόστρωμα. Η ιδιαιτερότητα των καταλυτικών ιδιοτήτων των ενζύμων εκδηλώνεται στο γεγονός ότι το ένζυμο, κατά κανόνα, δρα μόνο σε μια συγκεκριμένη ουσία. Στην αυστηρή ιδιαιτερότητα των ενζύμων υποδεικνύει το γεγονός ότι σε περιπτώσεις στερεοϊσομερίας, ένα ορισμένο ένζυμο καταλύει μόνο ένα διαχωρισμό στερεοϊσομερών. Η ιδιαιτερότητα των ενζύμων είναι η βασική βιολογική ιδιοκτησία τους, χωρίς το οποίο ο διαταγμένος μεταβολισμός είναι αδύνατος.
Σε αυτό το έγγραφο, οι διεργασίες της διάσπασης από το ενζυμικό υπόστρωμα σαχράσης - σακχαρόζης και η διάσπαση του αμύλου με την ενζυμική αμυλάση, η οποία περιέχεται στον ανθρώπινο σάλιο.
Εκχύλιση του μυστικού από κύτταρα ζυμομυκήτων
Υλικά και αντιδραστήρια:
· Πατητική μαγιά - 10 g
· Ομογενοποιητής (κονίαμα με γουδοχέρι)
· Άμμος χαλαζία
· Αποσταγμένο νερό
Πρόοδος
10 γραμμάρια ξηρού ζύμης τοποθετούνται σε κονίαμα, προσθέστε 10 ml απεσταγμένου νερού και ομογενοποιούνται σε ένα πορσελάνη κονίαμα με μικρή ποσότητα άμμου χαλαζία για την καταστροφή των κυτταρικών τοιχωμάτων. Στη συνέχεια, ένα πορσελάνη κονία με ένα ομογενοσύκα τοποθετείται σε ένα ντουλάπι ξήρανσης με θερμοκρασία 60 0 ύπνου 30-40 λεπτά.
Αφού λήξει ο καθορισμένος χρόνος, αφαιρέστε το κονίαμα, ψύξτε, προσθέστε 30 ml απεσταγμένου νερού και τρίψτε τα περιεχόμενα του κονιάματος σε μια ομοιογενή μάζα.
Στη συνέχεια, ομογενοποίηση, για να καθιζάνει την κυτταρική μάζα, φυγοκεντρήθηκε στις 3000 rpm για 15 λεπτά. Το προκύπτον υπερκείμενο είναι το εκχύλισμα της ζάχαρης.
Εργαστηριακή εργασία
Προσδιορισμός της δραστηριότητας της καταλάσης (1.11.1.6)
1) με υπολογισμό υπερμαγγανικού καλίου και καταλάσης(Μέθοδος Bach και Zubkov)
Αρχή της μεθόδου. Το ένζυμο της καταλάσης περιέχεται σε μεγάλες ποσότητες σε ερυθρά αιμοσφαίρια, καθώς και σε όλους τους ιστούς και τα σωματικά υγρά. Ο βιολογικός ρόλος της καταλάσης είναι να εξουδετερώσει το υπεροξείδιο του υδρογόνου (n2 o 2. ) με αποσύνθεση στο μοριακό οξυγόνο και το νερό:
2Ν 2 o 2 → o 2 + 2n 2 o
Η δραστικότητα του ενζύμου εκφράζεται χρησιμοποιώντας μια ένδειξη καταλάσης και καταλάσης.Αριθμός καταλάσης Καλούν την ποσότητα του υπεροξειδίου του υδρογόνου, η οποία χωρίζει 1,0 μΐ αίματος σε μια ορισμένη χρονική περίοδο. Η ποσότητα του κατακρημνισμένου υπεροξειδίου του υδρογόνου κρίνεται από τη διαφορά στον αριθμό του υπερμαγγανικού καλίου, το οποίο πήγε στην τιτλοδότηση του ελέγχου και των πρωτοτύπων.
Δείκτης καταλάσης Υπολογίστε τον λόγο του αριθμού καταλάσης στην ποσότητα εκατομμυρίων ερυθροκυττάρων σε 1,0 μΐ του αίματος υπό μελέτη.
Αντιδραστήρια: 1) 1% διάλυμα Η2Ο 2; 2) 10% διάλυμα θειικού οξέος; 3) 0,1 m διάλυμα υπερμαγγανικού καλίου (για τιτλοδότηση).
Αντικείμενο μελέτης: Αιμολύνι που λαμβάνεται με αναπαραγωγή αίματος αποσταγμένου νερού σε αναλογία 1: 1000.
Μαγείρεμα : Τα 10 ml απεσταγμένου νερού χύνεται σε μια διαστατική φιάλη ανά 100 ml και προστίθενται 0,1 ml αίματος στη μικροπιπέτα. Η πιπέτα πλένεται αρκετές φορές το ίδιο διάλυμα. Το νερό προστίθεται στη φιάλη στην ετικέτα και λαμβάνει το βασικό διάλυμα αίματος (1: 1000), το οποίο χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του αριθμού καταλάσης.
Πρόοδος.
Σε δύο φιάλες Tetting (εμπειρία και έλεγχος) χύνεται 7 ml νερού και σε κάθε προσθήκη 1 ml του κύριου διαλύματος αίματος. Κάθε φιάλη γίνεται ακριβώς 2 ml. Προστίθεται 3 ml στη φιάλη ελέγχου για να χωρίσει τη καταλάση. Και οι δύο φιάλες επωάζονται σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Στη συνέχεια, 3 ml διαλύματος θειικού οξέος 10% χύνεται σε πειραματική φιάλη. Τα περιεχόμενα των δύο φιαλών τιτλοποιούνται κατά 0,1 Μ ένα διάλυμα υπερμαγγανικού καλίου μέχρις ότου εμφανιστεί ροζ χρώση. Πολλαπλές η διαφορά μεταξύ των αποτελεσμάτων της εμπειρίας και του ελέγχου κατά 1,7 και λαμβάνουν έναν αριθμό καταλάσης αίματος.
Παράδειγμα υπολογισμού : Mol ισοδύναμο n2 o 2. ισούται με 17 g. Έτσι, σε 1 ml διαλύματος 0,1 Μ περιέχει 1,7 mg2 o 2. ? Πολλαπλασιάζοντας το 1,7 έως τη διαφορά μεταξύ της ποσότητας ml 0,1 m του διαλύματος υπερμαγγανικού καλίου, το οποίο πήγε στον τίτλο τα περιεχόμενα του ελέγχου και της πειραματικής φιάλης, λαμβάνουν τον αριθμό των mg2 o 2. που χωρίζει 1 μl του αίματος υπό μελέτη, δηλαδή, υπολογίζουν αμέσως τη καταλάση.
Κανόνες: Καταλάβω κυμαίνεται από 10 έως 15 μονάδες,
Δείκτης καταλάσης είναι 2-3x10 -: 6 , στην κλινική, χρησιμοποιείται συχνότερα
Κλινική και διαγνωστική αξία.Η υψηλή δραστικότητα της καταλοίσεως παρατηρείται σε ολεοδέσμη και μακροκυτταρική αναιμία, καθώς και κατά την είσοδο οινοπνεύματος, καφεΐνης, ακετόνης τηλεόρασης στο σώμα. Η δραστηριότητα της καταλάσης στο αίμα μειώνεται με καρκίνο, αναιμία, φυματίωση και άλλες ασθένειες.
2) Χρησιμοποιώντας το MolyBdate αμμωνίου
Η καταλάση είναι ένα από τα πιο φυλογενετικά αρχαία ένζυμα του αντιοξειδωτικού συστήματος του οργανισμού, αναφέρεται στην κατηγορία οξειδωφεραστικών, η καταλύοντας τις αντιδράσεις οξειδοαναγωγής περιλαμβάνεται στην ομάδα υδροοξειδάσης χρησιμοποιώντας το υπόστρωμα2Ο 2 (2 Η2Ο2 → 2Ν2O + O 2 ) ή οργανικά υδροπερκερούς, κατά συνέπεια, μαζί με την καταλάση, έχει δραστικότητα υπεροξειδάσης. Σύμφωνα με τη δομή - η αιμοπρωτεΐνη που περιέχει 4 ομάδες HEM. Η καταλάση είναι ένα ενδοκυτταρικό ένζυμο. Στο κυκλοφορούχο αίμα, το μεγαλύτερο μερίδιο του ενζύμου εντοπίζεται στο κυτταρόπλασμα των ερυθροκυττάρων.
Λειτουργίες καταλάσης:
Συμμετέχει στην προστασία του σώματος από το ενδογενές υπεροξείδιο του υδρογόνου, το οποίο παράγεται ως αποτέλεσμα της λειτουργίας των αερόβιων αφυδρογονάσεων.
Καταστέλλει τον σχηματισμό ριζών υδροξυλίου.
Προστατεύει από την οξείδωση της αιμοσφαιρίνης και συμβάλλει στη μεταφορά οξυγόνου μέσα στις κυτταρικές δομές.
Συμμετέχει στον οξειδωτικό μεταβολισμό ορισμένων αμινοξέων.
Προστατεύει από την οξείδωση της ομάδας SH, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που περιλαμβάνονται στο ενεργό κέντρο πολλών ενζύμων και λειτουργικά δραστικών πρωτεϊνών.
Αρχή της μεθόδου. Η δραστικότητα της καταλάσης καθορίζεται από τη μετατροπή του ενζύμου υποστρώματος (υπεροξείδιο του υδρογόνου), το οποίο είναι ικανό για το σχηματισμό ενός βαμμένου συμπλόκου με άλατα μολυβδάτη αμμώνιο.
Αντιδραστήρια. 1) 0,03% διάλυμα H 2 o 2 ? 2) 4% διάλυμα μολυβδοδίνης αμμωνίου.
Βιολογικό υλικό:Ορός αίματος.
Πρόοδος. Έμπειρη δοκιμή: Σε 2,0 ml ενός διαλύματος υπεροξειδίου του υδρογόνου 0,03% προστίθεται 0,1 ml ορού. ΣΕΈχοντας μια δοκιμή Αντί του ορού - 0,1 ml απεσταγμένου νερού.ΣΕ Δείγμα ελέγχου Αντί για το υπεροξείδιο, προστίθενται 2,0 ml απεσταγμένου νερού. Τα δείγματα επωάζουν 10 λεπτά στα 37° C, στη συνέχεια σταματήστε την αντίδραση προσθέτοντας 1,0 ml διαλύματος 4% molybdate αμμωνίου.Φυγοκεντρίστε 10 λεπτά στις 4000 rpm. Μετρήστε την οπτική πυκνότητα της αδράνειας και των πρωτοτύπων έναντι του ελέγχου σε μήκος κύματος 410 nm.
Πληρωμή Η δραστηριότητα της καταλάσης στον ορό:
Ένα (mkat / l) \u003d
όπου e op και e - Εξέταση των έμπειρων και αδρανών δειγμάτων,
3.1 - Γενική αναπαραγωγή,
T - επώαση χρόνου, c,
V. - τον όγκο του τραυματισμένου δείγματος, L,
22,210 3 - Συντελεστής εξαφάνισης,mmol -1 cm -1.
Η δραστηριότητα της καταλάσης στον ορό 2,6+ 0,5 mut / l
Εγγραφή της εργασίας.
Καταγράψτε την αρχή της μεθόδου. Να διορθώσετε τα αποτελέσματα, να σχεδιάσετε.
Η αρχή της μεθόδου:Το μολυβδαίνιο-οξειδωμένο αμμώνιο με διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου σχηματίζει μια ολοκληρωμένη κίτρινη ένωση. Η καταλάση καταστρέφει το υπεροξείδιο του υδρογόνου σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο:
2Ν 2 o 2 \u003d 2n 2 o + o 2
Ο βαθμός μείωσης της έντασης του χρώματος του διαλύματος είναι ανάλογος με τη δραστηριότητα της καταλάσης.
Πρόοδος:Ένα 4 mL 0,03% διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου προστίθεται στον πειραματικό και σωλήνα ελέγχου, προστίθενται 0,2 ml αιμολυζόμενης αίματος στον πειραματικό δοκιμαστικό σωλήνα (αραίωση 1: 1000). Αναστέλλουν το δείγμα 20 λεπτά στους 37 0 C. κατόπιν και στους δύο δοκιμαστικούς σωλήνες κατασκευάζονται σε 2 ml διαλύματος μολυβδαινικού αμμωνίου και στον έλεγχο - ένα επιπλέον 0,2 ml αιμολυζικής επαφής. Ταραχή. Μετρήστε την οπτική πυκνότητα του πειραματικού και του δείγματος ελέγχου έναντι του νερού σε ένα μπλε φίλτρο. Προσδιορίστε τη δραστηριότητα της καταλάσης από τον τύπο:
(E K - E 0). 5600.
A \u003d ------------------- όπου
Και - η ενεργότητα της καταλάσης (Icmol Ν2Ο2 / λεπτό ανά ml αίματος).
E προς-εξαφάνιση του ελέγχου · E 0 - Εξέταση της εμπειρίας.
Κατά τη στιγμή της επώασης, λεπτό. 5600 - Συντελεστής
Κανονικά, η δραστικότητα της καταλάσης είναι 135 μmol η2Ο2 / λεπτό ανά ml
αίμα (σε σάλιο -12-16 μmol). Η δραστηριότητα της καταλάσης στο αίμα μπορεί να μειωθεί με την αναιμία, την ανάπτυξη όγκου, τη φυματίωση, ορισμένες άλλες ασθένειες και να αυξηθεί σε οξείες φλεγμονώδεις διεργασίες (σε σάλιο με φλεγμονώδεις διεργασίες του στοματικού βλεννογόνου).
Αγροτική και σύντομα απαντήστε στα εξής:
1. Μπορεί η οξείδωση του CH 3 - CH 2 - CH2 - IT ®
CH 3 - CH 2 - CH \u003d Ο σε μέσο χωρίς οξυγόνο; Ποιες προϋποθέσεις είναι απαραίτητες για αυτό; Γράψτε ένα σχήμα αντίδρασης.
2. Μπορεί και με ποια κατάσταση σε ένα μέσο χωρίς οξυγόνο συμβαίνει η οξείδωση με τον τύπο Ch 3 - CH 2 - CH \u003d O® CH 3 - CH2 - Soam; Καθορίστε τα απαραίτητα συστατικά, δημιουργήστε ένα σχήμα αντίδρασης. Πώς να αποσαφηνίσετε την εμφάνιση δύο ατόμων οξυγόνου στο προϊόν αντίδρασης.
3. Είναι το οξυγόνο εξαιρετικό (μόνο) ένας πεπερασμένος δέκτης υδρογόνου σε μια αναπνευστική αλυσίδα ιστού και γενικά σε βιολογική οξείδωση;
4. Γιατί ήταν η οξείδωση στην άγρια \u200b\u200bφύση που εντοπίστηκε με καύση έξω από το σώμα; Ονομάστε τα εξωτερικά σημάδια ομοιότητας μεταξύ της καύσης και της διαδικασίας οξείδωσης στο σώμα. Ονομάστε τις διαφορές μεταξύ αυτών των διαδικασιών.
5. Γράψτε τις αντιδράσεις αφυδρογόνωσης των συνδέσεων:
R-CH 2 -CH 2 - R; R-ch \u003d o; R - Sony -R; R-ch \u003d ch-r
6. Ορισμός συμμόρφωσης:
Δυνατότητα επαναφοράς: Α. + 0,82; Β. +0.10; Β. + 0,25. G.- 0,22.
CPE CPE: 1.UMKIKINON; 2.Corodorod; 3.FMN; 4. Cytrochrom
7. Ποια από τις εισηγμένες ενώσεις είναι υποστρώματα της εξαρτώμενης από τα FAD-εξαρτώμενη αφυδρογονάση: γλυκόζη, σακχαρόζη. ηλεκτρικό οξύ; Γλυκερίνη Αλδεΰδη, NADN +.
8. Γράψτε ένα σχήμα ηλεκτρονίων και πρωτονίων από ισοκάτρα σε οξυγόνο (ισοκιττερτυροσφαιρίδιο - υπερεκμετάνιο ένζυμο) και καθορίστε
Το όνομα όλων των συγκροτημάτων ενζύμων.
9. Φαρμακευτικά παρασκευάσματα - Παράγωγα του Βανδινικού:
Α. Απομακρυσμένη μια υπνωτική δράση.
Β. Ενεργοποιήστε την αναπνοή του υφάσματος.
Ερ.: Αναστέλλει το NADN-DEHYDOGRENSESE.
Δ. Να προκαλέσει μια υποζυτική κατάσταση.
Εργαστηριακός αριθμός εργασίας 1
Ο ρόλος των ενζύμων στην επιτάχυνση της αντίδρασης στο κελί
(Προσδιορισμός της δραστηριότητας της καταλάσης)
Σκοπός: Ανιχνεύστε τη δράση του ενζύμου καταλάσης σε φυτικά και ζωικά κύτταρα, συγκρίνετε την ενζυματική δραστικότητα των φυσικών και κατεστραμμένων κυττάρων βρασμού κυττάρων.
Εξοπλισμός: 3% διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου, τεμάχια ακατέργαστων και βρασμένων πατατών και κρέατος (ήπαρ, πνεύμονες), δοκιμαστικοί σωλήνες.
Ανίχνευση της δραστηριότητας της καταλάσης
Η καταλάση είναι ένα ένζυμο που καταλύει την αποσύνθεση του υπεροξειδίου του υδρογόνου με το σχηματισμό μοριακού οξυγόνου που απελευθερώνεται με τη μορφή φυσαλίδων αερίου:
Καταλάβω
2 Η2Ο 2 _ → 2Η2 O + O 2
Το υπεροξείδιο του υδρογόνου σχηματίζεται σε ορισμένα φυτικά και ζωικά κύτταρα ως παραπροϊόν των οξειδωτικών αντιδράσεων αντίδρασης. Αυτή η ένωση είναι τοξική για τα κύτταρα και η καταλάση εξασφαλίζει αποτελεσματική απομάκρυνση. Η Catalase είναι ένα από τα ταχύτερα ενζύμια εργασίας: ένα μόριο καταλάσης αποσυντίθεται σε ένα δευτερόλεπτο έως 200.000 μόρια υπεροξειδίου του υδρογόνου. Η καταλάση εντοπίζεται σε φυσαλίδες μεμβράνης κυττάρων - μικροσκοπίων και υπεροξύμων.
Πρόοδος
Πάρτε 4 καθαρά σωλήνες και τοποθετήστε μια μικρή ποσότητα ωραίων πατατών στο πρώτο από αυτά, στο δεύτερο - λίγο από βρασμένες πατάτες, στο τρίτο - ψιλοκομμένο κομμάτια κρέατος (ήπαρ, αστραπή), στο τέταρτο - λίγο θρυμματισμένο Βραστό κρέας. Προσθέστε 3-4 ml σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα. 3% διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου. Αγοράστε τι συμβαίνει σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Τα αποτελέσματα επιτήρησης περιλαμβάνουν στον πίνακα.
Ενζυματική δράση φυσικών και κατεστραμμένων κυττάρων
| Ενα αντικείμενο | Φαινόμενα που παρατηρούνται στον δοκιμαστικό σωλήνα | Επεξήγηση παρατηρήσεων |
| Ακατέργαστες πατάτες | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ |
| Βραστές πατάτες | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ |
| Ωμό κρέας | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ |
| Βραστό κρέας | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ | _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ |
Εξηγεί τα επιτευχθέντα αποτελέσματα. Πάρτε το συμπέρασμα σχετικά με την καταλυτική δραστηριότητα της καταλάσης σε ζωντανά και νεκρά κύτταρα.
Έξοδος: ________
_______________
_______________
_____________
Ερωτήσεις ελέγχου:
1. Τι είναι τα ένζυμα; Ποια δομή των πρωτεϊνών δημιουργείται από τη δραστηριότητά τους; ___________
2. Ποιες ιδιότητες έχουν τα ένζυμα; ______
3. Τι ονομάζεται ενεργό κέντρο ενζύμου; Πόσα τέτοια κέντρα μπορούν να είναι στο ένζυμο; _
4. Λόγω των ενζύμων επιταχύνουν τις χημικές αντιδράσεις; ___________________________
5. * Το αλκοόλ, η φαινόλη, το χλώριο και άλλα αντισηπτικά χρησιμοποιούνται στην ιατρική για τη θεραπεία περιοχών του σώματος που έχουν μολυνθεί από παθογόνο χλωρίδα. Εξήγησε γιατί ._____
Gr .___ 3.
Εργαστηριακός αριθμός εργασίας 2
Ανίχνευση οργανικών ουσιών
Σκοπός: Εκτοπικές οργανικές ουσίες σε ιστούς (άμυλο, πρωτεΐνες, λίπη) και εξερευνούν τις ιδιότητές τους.
Εξοπλισμός:Μια τσάντα γάζας, λείανση σιταριού (αλεύρι σίτου), 5% διάλυμα ιωδίου, ηλιόσποροι (ή οποιαδήποτε άλλη ελαιοκράμβη: βαμβάκι, LNA, φιστίκια, σόγια κ.λπ.).
ΟΡΓΑΝΙΚΕΣ ΕΝΩΣΕΙΣ - Οι ουσίες που περιέχουν άνθρακα χαρακτηριστικά της άγριας φύσης είναι κατά μέσο όρο 20-30% της μάζας των κυττάρων των ζωντανών οργανισμών. Οι κύριες ιδιότητες των κυττάρων και των οργανισμών προσδιορίζονται με οργανικά πολυμερή: πρωτεΐνες, υδατάνθρακες, νουκλεϊνικά οξέα, καθώς και σύνθετες ενώσεις - λίπη και ένα αριθμό μορίων ορμονικής, χρωστικές, χωριστά νουκλεοτίδια, ειδικότερα ΑΤΡ. Εκτός από τις οργανικές ουσίες σε κύτταρα, οι ορυκτές ουσίες και το νερό περιέχονται, αλλά η περιεκτικότητα σε οργανικές ουσίες είναι πάντα υψηλότερη. Η ποσότητα οργανικών ουσιών μπορεί να είναι διαφορετική.
Πρωτεΐνες -Ακανόνιστα ή ενημερωτικά, πολυμερή των οποίων τα μονομερή είναι αμινοξέα.
Στη σύνθεσή της, οι πρωτεΐνες χωρίζονται σε:
- Απλός - Αποτελείται από μόνα αμινοξέα. Για παράδειγμα, οι φυτικές πρωτεΐνες είναι οι προλινές, περιέχονται στους σπόρους γλουτένης των σιτηρών, δεν διαλύονται στο νερό.
- Εκλεπτυσμένο - Εκτός από τα αμινοξέα, άλλες οργανικές ενώσεις (νουκλεϊνικά οξέα, λιπίδια, υδατάνθρακες), ενώσεις φωσφόρου, τα μέταλλα είναι στη σύνθεσή του. Συνεπώς, φορούν ονόματα: νουκλεοπρωτεϊνές, λιποπρωτεΐνες, γλυκοπρωτεΐνες, φωσφο- και μεταλλοπρωτεΐνες.
Υδατάνθρακες - Ενώσεις που περιέχουν άνθρακα, υδρογόνο και οξυγόνο. Διαιρούμενο σε μονο-, δι- και πολυσακχαρίτες. Οι πολυσακχαρίτες είναι υψηλής μοριακής υδατανθράκων που αποτελούνται από ένα μεγάλο αριθμό μονοσακχαριτών, το μοριακό τους βάρος είναι μεγάλο, τα μόρια έχουν γραμμική ή διακλαδισμένη δομή. Στη λειτουργικότητα, διακρίνονται οι πολυσακχαρίτες των αντιγράφων ασφαλείας και των δομικών σκοπών. Δεν είναι διαλυτό στο νερό άμυλο - κύριο αποθεματικό πολυσακχαρίτη φυτικών κυττάρων (πολυμερή - γλυκόζη). Υπό δράση σχετικά με αυτό, το ιώδιο λάμπει. Περιέχονται σε μεγάλους αριθμούς σε κονδύλους πατάτας, φρούτα, σπόροι. Γλυκογόνο- ο πολυσακχαρίτης που περιέχεται στους ανθρώπινους ιστούς και τα ζώα του ανθρώπου, καθώς και στα μανιτάρια και τη ζύμη, διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στη μετασχηματισμό των υδατανθράκων στα κύτταρα. Ίνες (κυτταρίνη) - ο κύριος δομικός πολυσακχαρίτης των κελυφών κυττάρων των φυτών.
Λιπίδια και λιποειδή- λίπη και φυλλώδεις ουσίες - οργανικές ενώσεις με διαφορετική δομή. Δεν διαλύονται στο νερό, αλλά είναι καλά διαλυμένα σε οργανικές ενώσεις: αιθέρα, βενζίνη, χλωροφόρμιο κ.λπ.
Σύμφωνα με τη χημική δομή του λιπιδίου - οι ενώσεις της αλκοόλης γλυκερόλης - τρόπωντο - με υψηλά μοριακά οργανικά οξέα (λίπος), δεν έχουν δομή πολυμερούς.
Σύνθεση σπόρων
Εργαστηριακός αριθμός εργασίας 1Θέμα: Καταλυτική δραστηριότητα των ενζύμων στα ζωντανά κύτταρα
Σκοπός: Προσδιορίστε την καταλυτική λειτουργία των πρωτεϊνών σε ζωντανά κύτταρα, σχηματίζουν γνώση σχετικά με τον ρόλο των ενζύμων στα κύτταρα, ενοποιήστε την ικανότητα να εργάζεστε με ένα μικροσκόπιο, να συμπεριφέρετε πειράματα και να εξηγήσετε τα αποτελέσματα της εργασίας. Εξοπλισμός: Ακατέργαστες και βραστές πατάτες, φύλλα ελέφαντα (άλλα φυτά), φρέσκο \u200b\u200bδιάλυμα 3% υδρογόνου υπεροξείδιο, δοκιμαστικοί σωλήνες, τσιμπιδάκια, άμμος, κονίαμα και γουδοχέρι, σημειωματάριο, στυλό, απλό μολύβι, γραμμή.
Πρόοδος:
Προετοιμάστε δύο και τοποθετήστε την στην πρώτη μικρή άμμο, στο δεύτερο - ένα κομμάτι ακατέργαστων πατατών, στο τρίτο - μια φέτα βρασμένων πατατών, προσθέστε λίγο υπεροξείδιο του υδρογόνου σε κάθε σωλήνα. Περάστε τι θα συμβεί σε κάθε σωλήνα.
Αλέστε ένα κομμάτι ακατέργαστων πατατών σε ένα κονίαμα με μια μικρή άμμο.
Μεταφέρετε τις ψιλοκομμένες πατάτες μαζί με την άμμο στον δοκιμαστικό σωλήνα και ρίξτε ένα μικρό υπεροξείδιο του υδρογόνου.
Συγκρίνετε τη δραστηριότητα του θρυμματισμένου και ολόκληρου του φυτικού ιστού.
Κάντε ένα τραπέζι που δείχνει τη δραστηριότητα κάθε ιστού με διαφορετική επεξεργασία. Εξηγεί τα επιτευχθέντα αποτελέσματα. Απάντησε στις ερωτήσεις:
Παρατηρήσεις
Υπεροξείδιο του υδρογόνου και ακατέργαστες πατάτες
Το οξυγόνο απελευθερώνεται, η πρωτεΐνη αποσυντίθεται στην κύρια δομή και μετατρέπεται σε αφρό
Υπεροξείδιο του υδρογόνου και βραστές πατάτες
Δεν υπάρχουν αντιδράσεις
Απαντήστε σε ερωτήσεις: Ποιοι δοκιμαστικοί σωλήνες έδειξαν τη δραστηριότητα του ενζύμου καταλάσης; Εξήγησε γιατί.
Το ένζυμο της καταλάσης καταλύει την αντίδραση αποσύνθεσης του υπεροξειδίου του υδρογόνου σε νερό και μοριακό οξυγόνο: Η2Ο2 + Η2Ο2 \u003d O2 + 2N2O. Ο βιολογικός ρόλος του Κ. Είναι η υποβάθμιση του υπεροξειδίου του υδρογόνου που σχηματίζεται σε κύτταρα ως αποτέλεσμα μιας σειράς φαινοοπρωτεϊνικών οξειδίων (οξειδάσης ξανθίνης, οξειδάσης γλυκόζης, μονοαμινοξιδάσης κλπ.) Και εξασφάλιση της αποτελεσματικής προστασίας των κυτταρικών δομών από την καταστροφή υπό τη δράση υπό τη δράση του υπεροξειδίου του υδρογόνου. Η γενετικά καθορισμένη ανεπάρκεια του Κ. Είναι μία από τις αιτίες της λεγόμενης ακρανοί - κληρονομικής ασθένειας, κλινικά εκδηλωμένη από το έλκος του ρινικού βλεννογόνου και της στοματικής κοιλότητας, μερικές φορές έντονα προφέρονται ατροφικές αλλαγές στα κυψελιδικά διαμερίσματα και την οδοντιατρική απώλεια . Δραστηριότητα που εκδηλώνεται σε 1.3 δοκιμαστικούς σωλήνες, επειδή Είχαν ωμά τρόφιμα που περιέχουν πρωτεΐνες. Και στους υπόλοιπους δοκιμαστικούς σωλήνες υπήρχαν προϊόντα με προστατευμένο προστατευμένο στη διαδικασία μαγειρέματος και η αντίδραση δεν εκδηλώθηκε. Επομένως, ο οργανισμός απορροφάται καλύτερα από τα προϊόντα που περιέχουν πρωτεΐνη.
Πώς εκδηλώνεται η ενζυμική δραστηριότητα και τα νεκρά υφάσματα;Εξηγήστε το παρατηρούμενο φαινόμενο. Στα νεκρά υφάσματα δεν υπάρχει δραστηριότητα των ενζύμων, επειδή Η πρωτεΐνη σε αυτά καταστράφηκε κατά τη διάρκεια του μαγειρέματος. Και σε ζωντανούς ιστούς, το οξυγόνο απελευθερώθηκε όταν αλληλεπιδρά με το υπεροξείδιο του υδρογόνου και η πρωτεΐνη που χωρίστηκε στην πρωτογενής δομή μετατράπηκε σε αφρό.
Πώς το τεμαχισμό του υφάσματος επηρεάζει τη δραστηριότητα του ενζύμου στους ζωντανούς ιστούς των φυτών και των ζώων; Κατά την άλεση ζωντανών ιστών, η αντίδραση περνά ταχύτερα, επειδή Η περιοχή επαφής της πρωτεΐνης και του υπεροξειδίου του υδρογόνου αυξάνει τον τρόπο με τον οποίο προτείνετε να μετρήσετε τον ρυθμό αποσύνθεσης του υπεροξειδίου του υδρογόνου; V \u003d kc (α) c (β) όπου το V είναι η ταχύτητα της χημικής αντίδρασης Κ - η σταθερά ρυθμού C - μια αλλαγή στη συγκέντρωση καθώς νομίζετε ότι όλοι οι ζωντανοί οργανισμοί περιέχουν ένα ένζυμο καταλάσης που παρέχει μια αποσύνθεση υπεροξειδίου του υδρογόνου ;
Δικαιολογήστε την απάντηση. Δεδομένου ότι πρόκειται για ένα ενζυμικό κλάδο οξειδωτόνιο, καταλύει την αποσύνθεση του τοξικού για τα ζωντανά κύτταρα του υπεροξειδίου του υδρογόνου σε νερό και οξυγόνο. Που περιέχονται σε λυσοσώματα. Μπορεί να ολοκληρωθεί το συμπέρασμα ότι περιέχεται σε όλα τα κύτταρα των ζωντανών οργανισμών. Εξηγήστε τις παρατηρήσεις σας. Έξοδος λέξεων.
Συμπέρασμα: Η πρωτεΐνη περιέχεται μόνο στα ζωντανά προϊόντα και στα βρασμένα προϊόντα που καταστράφηκαν, οπότε καμία αντίδραση δεν συμβαίνει σε αυτά. Εάν τα προϊόντα θρυμματίζονται, η αντίδραση θα περάσει ταχύτερα.